一、背景介绍蛋白质在储存过程中面临多种失活风险包括聚集、降解、构象改变以及与容器表面的非特异性吸附。传统上研究者常使用甘油作为蛋白稳定剂但甘油存在粘度高、移液困难、可能干扰下游实验等局限性。由艾美捷代理Cell Biolabs公司推出的专利性10X蛋白稳定溶液货号PRB-5210为蛋白质的长期活性保存提供了一种更优的替代方案。该稳定溶液以10倍浓缩的缓冲液形式提供可直接加入目标蛋白溶液中无需预先稀释操作简便。其设计理念是通过低分子量组分的协同作用在不显著改变溶液体系的前提下为蛋白质提供稳定的微环境从而延长储存寿命。二、产品核心特性1. 优异的稳定效果与传统方法如添加甘油相比该稳定溶液能够有效稳定大多数酶及其他蛋白质防止其在储存过程中发生聚集。聚集是蛋白质失活的主要机制之一该溶液通过优化溶剂环境减少了蛋白质分子间的疏水相互作用从而维持其单分散状态。2. 抵御恶劣环境条件该溶液能够保护蛋白质免受苛刻环境条件的冲击包括高温波动即使储存温度出现短暂升高如冰箱故障、反复开门蛋白质活性仍可得到较好维持。反复冻融对于需要多次取用的蛋白样品该溶液显著降低了冻融循环带来的活性损失。低分子量组分起到类似冷冻保护剂的作用减少冰晶对蛋白质结构的机械损伤。3. 易于去除的低分子量组分与甘油分子量92 Da相比该溶液中的稳定成分均为低分子量化合物。如有需要可在下游实验前通过透析或凝胶过滤脱盐轻松去除不会对后续检测如酶活测定、蛋白互作分析、质谱鉴定等产生干扰。4. 无毒性与兼容性该溶液为非毒性配方使用安全。对于不希望去除稳定剂的下游应用如某些粗酶反应可直接使用含稳定剂的蛋白溶液多数情况下不会抑制后续反应。三、储存条件与有效期储存温度收到产品后应储存于-80℃。该温度下稳定溶液本身保持液态或半固态长期储存不易降解。有效期在正确储存条件下-80℃避免反复冻融自收货之日起一年内有效。建议在瓶身标注收货日期以便追踪。分装建议为避免多次冻融建议将稳定溶液分装为单次使用的小份后再冻存。每份取出使用后剩余部分应立即返回-80℃。四、使用方法操作步骤共两步步骤1添加稳定溶液向目标蛋白溶液中加入1/10体积的10X蛋白稳定溶液。例如若蛋白溶液体积为900 µL则加入100 µL的10X稳定溶液。轻轻混合确保充分混匀但避免剧烈振荡以免产生气泡或导致蛋白剪切。重要提示该稳定溶液以10X浓缩液形式提供请勿预先稀释。直接加入蛋白溶液即可达到1×工作浓度。预先稀释会导致稳定剂浓度不足影响保护效果。步骤2储存将混合后的蛋白样品置于适合该蛋白的储存温度下通常为4℃至-80℃之间。该稳定溶液不会改变目标蛋白原有的储存特性。例如某些蛋白质在冷冻温度下本身不稳定如某些膜蛋白、大分子复合物应继续冷藏4℃保存而非冷冻。对冻融稳定的蛋白质可储存于-20℃或-80℃。五、结果示例以下图表展示了典型结果。以下数据仅供参考不得用于解释实际结果。左图辣根过氧化物酶HRP的稳定性。将纯化的HRP在4°C或98°C下孵育60分钟然后在磷酸盐缓冲液PBS、PBS 50%甘油PBSG或PBS 蛋白质稳定溶液PSS的存在下通过与ELISA底物溶液反应来测试其活性。右图重组Cas9的稳定性。纯化的重组Cas9在25°C下于含有5%甘油的20 mM Tris pH 8、300 mM NaCl、10 mM EDTA的溶液中孵育6天灰色线分别用20%甘油橙色线、RIPA缓冲液绿色线或蛋白稳定溶液蓝色线处理后使用Cas9 ELISA试剂盒货号PRB-5079进行检测。